AAV亲和层析介质(II型)
1、产品简介
博进生物开发的 AAV 亲和层析介质(II 型) 专为纯化血清型 II型的腺相关病毒(AAV II)而设计的亲和层析介质。AAV亲和层析介质(II 型) 以高交联琼脂糖为基质 ,通过化学偶联纳米抗体为配基 ,该结构使能通过亲和层析法高效、工业规 模地纯化腺相关病毒(AAV)。
2、产品特性
参数 |
技术指标 |
平均粒径 |
90±15μm |
基质 |
高交联琼脂糖 |
功能基 |
纳米抗体 |
血清型 |
AAV II |
动态载量 |
>10 13 VG / mL |
流速 |
保留时间 > 3 min |
最大耐压 |
0.3 MPa |
pH 范围 |
1-11 |
离子强度范围 |
0-5 M Na Cl |
缓冲液相容性 |
可耐受所有常规试剂 ,包括乙二醇、4M 尿素、2-3M 盐酸胍 |
溶剂相容性 |
水、0-20%乙醇、 1-2M 有机酸(乙酸、磷酸、甘氨酸 等)。 避免使用强氧化剂和还原剂、丙酮、苯甲醇。 |
使用温度 |
4-30 ℃ |
保存 |
2~10 ℃(20%乙醇) ,避免冷冻 |
3、 应用
AAV 亲和层析介质(II 型) 用于腺相关病毒(AAVII)的快速、 高效纯化。 其层 析操作通常包括平衡、上样、淋洗、洗脱、清洗等步骤。
具体的操作方法如下:
平衡:用 5~10CV 的平衡缓冲液(AAV 在中性 pH 附近与 AAV 亲和层析介质结合 ,因此常规缓冲液体系(如 PBS、Tris、柠檬酸盐)均可用于AAV的纯化 ,例如 20 mM PB+0.5M NaCl ,pH7.4) )以不高于上限压力的流速平衡离子交换柱 ,至流出液电导和 pH 不变(与平衡液一致)。
上样:样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。为了避免堵塞层析柱 ,样品溶液应经离心或微滤(0.45μm) 处理。 上样量根据介质的载量和样品溶液中 AAV 的含 量计算。
淋洗:上样结束后继续用平衡缓冲液淋洗 ,直至紫外下降至基线。
洗脱:用洗脱缓冲液(通常通过降低 pH 来洗脱 ,例如在 pH 2 至 5 的范围 内 ,如 0.1 M 甘氨酸 + 0.5M NaCl , pH 2.5) 洗脱收集流出液。 由于 AAV 对高酸 性条件敏感 ,因此收集的洗脱液应立即中和。
清洗:AAV 亲和层析介质使用后需要对 AAV 亲和层析介质进行清洗(纳米抗对碱耐受性不高 ,不建议用 NaOH 溶液清洗 AAV 亲和层析介质) ,推荐的清洗步骤如下:
(1) 用 0.1M 柠檬酸 pH 2.0(亦可用 0.1M 甘氨酸 pH 2.0) 清洗介质;
(2) 用 2M 盐酸胍或 2M 尿素清洗介质;
(3) 用中性 pH 缓冲液(如平衡缓冲液 20 mM PB+0.5M NaCl , pH7.4) 重新平衡进行下一循环的纯化 ,或储存在 20%乙醇中。
保存:2-10℃ 储存于 20%乙醇中;层析柱中的介质可用 20%的乙醇冲洗后 保存于 2-10℃。
其它注意事项:在使用和保存柱子的时候 ,要避免柱子流干或密封不严 ,防止气泡进入。
4、 订购信息
产 品 名 称 |
货号 |
规格 |
AAV 亲和层析介质(II 型) |
BG19-0010-02 |
50mL |
BG19-0010-04 |
500mL |
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BG19-0010-05 |
1L |
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BG19-0010-07 |
10L |
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BG19-0010-08 |
20L |