CM弱阳离子交换介质
1、产品简介
离子交换层析(Ion Exchange Chromatography)是根据生物分子表面电荷(种类、数目和分布)特异性实现对生物大分子分离纯化最常用的方法。博进生物开发的弱阳离子交换介质采用具有刚性结构的聚甲基丙烯酸酯微球作为基质,通过特有的表面修饰技术改善聚合物基质的亲水性,同时通过特有的纳微结构调控技术可实现30-1000nm不同孔径的介质,充分满足多肽、重组蛋白、核酸、疫苗、抗体及其衍生物、病毒或类病毒颗粒等生物大分子的分离纯化。博进该类型介质具有大通量的特点,尤其适用于粘稠料液。可根据客户应用需求的不同提供不同尺寸与孔径的系列产品,可以满足捕获、中度纯化、精细纯化、分析纯化各环节的应用,为客户提供生物样品从实验室纯化到工业化生产的整体解决方案。
2、产品参数
表1:博进弱阳离子HPCM系列介质参数总览
技术指标/型号 |
HPCM-30 |
平均粒径 |
40μm±10μm |
孔径 |
30nm |
基质 |
聚甲基丙烯酸酯 |
功能基 |
羧甲基(-CH2COO-) |
功能基类型 |
弱酸型配基 |
动态载量 |
≥40mg 溶菌酶 /ml wet resin gel |
典型应用 |
重组蛋白、核酸等生物大分子的分离纯化 |
最大耐压 |
1 MPa |
pH稳定性 |
pH 3-13 |
保存 |
2~30 ℃(20%乙醇) |
3、使用方法
博进弱阳离子交换介质广泛用于蛋白质、酶、多糖、核酸等的分离纯化。层析操作通常包括平衡、上样、淋洗、洗脱、再生等步骤。
具体的操作方法如下:
3.1平衡:
用5~10 CV的平衡缓冲液(如20 mM PB,pH 7.0,具体的缓冲体系应根据目标蛋白的稳定性和等电点进行筛选和优化)以不高于上限压力的流速平衡离子交换柱,至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。
3.2上样:
样品缓冲液应尽可能与平衡液一致,固体样品可用平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可用平衡液透析或添加相应量的盐;高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱,样品溶液应经离心或微滤(0.45μm)处理。上样量根据介质的载量和样品溶液中目标蛋白的含量计算。
3.3淋洗:
上样结束后继续用平衡缓冲液淋洗,直至紫外下降至基线。
3.4洗脱:
用洗脱缓冲液(如20 mM PB+1M NaCl,pH 7.0)洗脱,洗脱方式可采用pH梯度洗脱、线性梯度洗脱或阶梯式梯度洗脱,收集流出液。
3.5再生:
每次层析之后可用1-2 M NaCl清洗层析柱,除去强结合的蛋白。
3.6原位清洗(CIP):
介质使用5-10次(具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关)后,需要对介质进行原位清洗,可参考下表。
清洗溶液 |
清洗对象 |
清洗条件 |
2M NaCl |
离子键强结合的蛋白 |
3~4 CV |
1M NaOH |
沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白、脂蛋白 |
3~4 CV |
强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质 |
70%乙醇或30%异丙醇 |
不高于上限压力的流速冲洗3~4 CV(使用高浓度的有机溶剂时,为了避免产生气泡,应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法) |
3.7保存:
2-30℃储存于20%乙醇中;层析柱中的介质可用20%的乙醇冲洗后保存于2-30℃。
3.8其它注意事项:
在使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干或密封不严,防止气泡进入。
4、订购信息
产品名称 |
货号 |
规格 |
HPCM-30 弱阳离子交换介质 |
BG33-1210-02 |
50mL |
BG33-1210-04 |
500mL |
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BG33-1210-05 |
1L |
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BG33-1210-07 |
10L |
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BG33-1210-08 |
20L |