羟基磷灰石层析介质

包括以下产品：

羟基磷灰石层析I型 / 羟基磷灰石层析II型

1、产品简介

       羟基磷灰石层析介质是一种由钙和磷酸盐组成的可同时实现阳离子交换和钙金属亲和两种分离机制的填料。博进的羟基磷灰石层析介质分为I型和II型两种，I型对蛋白质具有更大的保留，对酸性蛋白质有更大的动态载量，主要纯化大部分蛋白质。II型对抗体、核酸等大分子有更大的保留，动态载量更高，因此更适合纯化抗体和核酸。

2、产品参数

3、使用方法 

       羟基磷灰石层析介质广泛用于抗体、抗体片段、重组蛋白、酶、核酸、病毒等的层析分离。层析操作通常包括平衡、上样、淋洗、洗脱、再生等步骤。

具体的操作方法如下：

3.1碱洗消毒：

     用1 M NaOH低流速冲洗层析柱30 min。

3.2平衡：

     用平衡缓冲液（如 20 mM MES，5 mM KPO₄ ，pH 6.5，具体的缓冲体系应根据目标蛋白的稳定性和等电点进行筛选和优化）以250-500cm/h平衡离子交换柱4-6 CV，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。

3.3上样：

     样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析或添加相应量的盐；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品溶液应经离心或微滤（0.45 μm）处理。上样量根据介质的载量和样品溶液中目标蛋白的含量计算。

3.4淋洗：

     上样结束后继续用平衡缓冲液淋洗，直至紫外下降至基线。

3.5洗脱：

     用洗脱缓冲液（如500 mM KPO₄, pH 6.5）洗脱，洗脱方式可采用pH梯度洗脱、线性梯度洗脱或阶梯式梯度洗脱，收集流出液。

3.6原位清洗：

     柱子使用5-10次（具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对柱子进行原位清洗：

   （1）可用500 mM的中性磷酸盐或者pH 11-12的磷酸三钠清洗。

   （2）可根据实际情况用含5 mM的磷酸根的中性缓冲液（加1-2 M KCl/NaCl或者8M 尿素/6M盐酸胍）。

3.7消毒：

     每次层析之后可用1M NaOH清洗消毒。

3.8保存：

     干粉或者保存在0.1 M NaOH溶液中，2-30℃的条件下保存。

3.9其他注意事项：

   （1）避免使用柠檬酸、EDTA；

   （2）在使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干或密封不严，防止气泡进入。

4、订购信息